緩(huǎn)衝液準備(bèi)
1．衝洗(xǐ)緩衝(chōng)液（0.1M磷酸鈉(nà)，pH7.2）。要避免緩衝液中含NaCl。配好的緩(huǎn)衝液(yè)放置(zhì)於4℃保存。
2．洗脫(tuō)緩衝液（0.1M磷酸鈉，0.1M氟(fú)化(huà)鈉，pH7.2）。使用(yòng)注射器時(shí)，洗(xǐ)脫緩(huǎn)衝(chōng)液(yè)需保(bǎo)存(cún)在4℃。
3．清洗緩衝液（0.1M磷酸(suān)）。
4．保存緩(huǎn)衝(chōng)液（0.02%疊n化(huà)鈉，0.1M磷酸(suān)鈉，pH7.2）。
1．從柱(zhù)子(zǐ)端(duān)部(bù)拿(ná)掉(diào)塞子，保(bǎo)存好(hǎo)這些(xiē)塞子(zǐ)，備(bèi)用(yòng)。
2．用10倍柱(zhù)體(tǐ)積衝(chōng)洗緩衝液平(píng)衡柱(zhù)子(zǐ)。因(yīn)為(wéi)保(bǎo)存緩(huǎn)衝液(yè)中含(hán)有(yǒu)0.02%的疊n化鈉用(yòng)來(lái)抑(yì)菌，為了(liǎo)去除疊(dié)n化(huà)物對離(lí)子的(dí)激(jī)發(fā)作(zuò)用，這步預平衡(héng)是必須的。使針筒充滿衝洗(xǐ)緩衝(chōng)液(yè)，插入柱子並把(bǎ)所(suǒ)有緩(huǎn)衝液推入柱子(zǐ)。
3．預(yù)冷（4℃）的細胞裂(liè)解液(yè)上(shàng)柱。使(shǐ)針(zhēn)筒充(chōng)滿裂解液(yè)，插(chā)入柱子(zǐ)並把所有(yǒu)裂(liè)解液推入柱(zhù)子。對(duì)於1ml柱子，可以(yǐ)上5ml的裂解液。
4．用15倍柱(zhù)體積(jī)衝洗緩衝(chōng)液衝洗(xǐ)柱子。使衝洗緩(huǎn)衝液充滿針筒，插(chā)入(rù)柱子並把所(suǒ)有的緩衝液(yè)推(tuī)入柱子。這步(bù)可(kě)以(yǐ)根據(jù)純化(huà)蛋白的需要(yào)增(zēng)加(jiā)額外的(dí)衝(chōng)洗步(bù)驟(zhòu)。
洗脫
1．使(shǐ)針筒充(chōng)滿6倍柱體(tǐ)積的(dí)洗(xǐ)脫緩衝(chōng)液(yè)，先把1.5倍柱體(tǐ)積(jī)的(dí)洗(xǐ)脫緩(huǎn)衝(chōng)液上柱。收(shōu)集1.5倍(bèi)柱體積(jī)的流(liú)出(chū)液，每(měi)部分0.5倍柱(zhù)體(tǐ)積(jī)，對(duì)其進行分(fēn)析(xī)。在(zài)第(dì)二(èr)部分收(shōu)集液中(zhōng)通(tōng)常(cháng)會(huì)含(hán)有(yǒu)一(yī)些純(chún)化的(dí)蛋(dàn)白。針筒也可(kě)以留在(zài)柱子(zǐ)上，用(yòng)塞(sāi)子塞住出口。
2．在(zài)室溫(wēn)下(xià)，用(yòng)洗(xǐ)脫(tuō)緩(huǎn)衝液孵育(yù)柱子至少30分鐘(zhōng)。如果在4℃下(xià)孵育，則(zé)至少孵育12小時。
3倍(bèi)柱體(tǐ)積(jī)洗脫(tuō)緩衝(chōng)液(yè)上柱。通(tōng)常大(dà)量(liáng)的(dí)蛋白(bái)會在前(qián)麵五部(bù)分洗脫(tuō)緩(huǎn)衝液(yè)中被(bèi)洗脫出來(lái)。
清(qīng)洗(xǐ)
1．用至少(shǎo)5倍(bèi)柱(zhù)體積(jī)的衝洗緩衝液衝洗柱(zhù)子(zǐ)。
2．用(yòng)3倍(bèi)柱(zhù)體積(jī)的清(qīng)洗(xǐ)緩衝液清洗柱(zhù)子。
3．用(yòng)5倍(bèi)柱(zhù)體(tǐ)積(jī)衝(chōng)洗緩衝液(yè)平(píng)衡柱子(zǐ)。
4．用(yòng)2倍柱體(tǐ)積保存緩衝液平衡柱子；蓋(gài)好(hǎo)柱(zhù)子並(bìng)保存於(yú)4℃。
以(yǐ)上(shàng)便是(shì)今(jīn)天(tiān)關(guān)於蛋白層(céng)析柱使用操作快(kuài)速指(zhǐ)南主要(yào)包括(kuò)四(sì)個(gè)部(bù)分(fēn)的全(quán)部(bù)分享了，希(xī)望(wàng)對大家今後使用本設(shè)備能(néng)有幫(bāng)助。
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