蛋白層析(xī)柱(zhù)的直徑大(dà)小不影(yǐng)響(xiǎng)分(fēn)離(lí)度,樣(yàng)品用(yòng)量大,可加大柱的(dí)直徑,一般製備(bèi)用(yòng)凝膠柱(zhù),直徑大於(yú)2厘米,但在加樣時(shí)應(yīng)將(jiāng)樣品均匀(yún)分布(bù)於(yú)凝(níng)膠柱床麵上。此(cǐ)外(wài),直徑(jìng)加大(dà),洗脫液(yè)體體(tǐ)積增加,樣品稀釋(shì)度大。
分(fēn)離度取決於柱高,為分(fēn)離(lí)不同(tóng)組(zǔ)分,凝膠(jiāo)柱床(chuáng)要(yào)有適宜的高度,分(fēn)離度與柱高的平(píng)方(fāng)根相(xiāng)關,但(dàn)由於(yú)軟凝膠(jiāo)柱(zhù)過(guò)高(gāo)擠(jǐ)壓變(biàn)形(xíng)阻(zǔ)塞,一般(bān)不(bù)超(chāo)過(guò)1米(mǐ)。分族分離(lí)時用短柱(zhù),一般凝膠(jiāo)柱(zhù)長(cháng)20-30厘米,柱(zhù)高(gāo)與直徑的比(bǐ)較5:1─10:1,凝膠床體積為樣品溶液體(tǐ)積的4-10倍(bèi)。分級(jí)分離(lí)時(shí)柱(zhù)高與直徑(jìng)之(zhī)綫為(wéi)20:1─100:1,常用凝膠柱(zhù)有50×25厘米(mǐ),10×25厘米。
蛋白(bái)層析柱濾板(bǎn)下的死體積(jī)應(yīng)盡(jìn)可能的小,如(rú)果支(zhī)掌濾板(bǎn)下(xià)的死體積大,被(bèi)分離(lí)組(zǔ)分之間重新(xīn)混合(hé)的可(kě)能性(xìng)就大,其(qí)結果是影響(xiǎng)洗脫峰形,出現拖尾出(chū)象,降低(dī)分(fēn)辯(biàn)力(lì)。在準確(què)分離(lí)時,死體積不能超(chāo)過總床體積(jī)的(dí)1/1000。
始終保持柱(zhù)內(nèi)液麵(miàn)高(gāo)於(yú)凝膠表麵,否則水分蒸發,凝(níng)膠(jiāo)變(biàn)幹。也要(yào)防止液(yè)體流幹,使(shǐ)凝膠混入大量氣泡,影(yǐng)響液體在柱內(nèi)的(dí)流動。所用(yòng)凝(níng)膠(jiāo)比較(jiào)昂(áng)貴,需(xū)小心操作,實驗後(hòu)回收,盡量避(bì)免浪(làng)費(fèi)和(hé)損(sǔn)失。
要(yào)很注(zhù)意的是,各接頭不能(néng)漏氣(qì),連接用(yòng)的小(xiǎo)乳膠管不要有(yǒu)破(pò)損(sǔn),否則造(zào)成(chéng)漏氣(qì),漏液(yè)。裝柱要均匀(yún),既(jì)不(bù)過鬆(sōng),也不過緊,要(yào)在要求(qiú)的操(cāo)作壓(yā)下(xià)裝(zhuāng)柱(zhù),流(liú)速不宜過(guò)快,避免因此壓緊凝膠。