蛋(dàn)白(bái)層(céng)析柱是凝(níng)膠層析技(jì)術中的(dí)主體,我們(mén)研究(jiū)所用的就(jiù)是同興玻璃儀(yí)器,一般用玻璃管或有機玻璃管(guǎn)。根據樣品(pǐn)混合物中各組(zǔ)分在固定相(xiāng)和流(liú)動相中分(fēn)配係數(shù)不同(tóng),從而(ér)分離(lí)的一(yī)種層(céng)析法(fǎ)。
蛋(dàn)白層析(xī)柱的直徑(jìng)大小(xiǎo)不影響分(fēn)離度(dù),樣品用(yòng)量(liáng)大(dà),可(kě)加大(dà)柱(zhù)的(dí)直徑,一(yī)般(bān)製備用凝膠柱,直徑(jìng)大於(yú)2厘米,但在加樣時應將(jiāng)樣(yàng)品均匀分(fēn)布於(yú)凝膠(jiāo)柱(zhù)床(chuáng)麵上。此(cǐ)外(wài),直徑加(jiā)大,洗(xǐ)脫(tuō)液體體積增加,樣(yàng)品(pǐn)稀(xī)釋度(dù)大(dà)。分(fēn)離(lí)度(dù)取決(jué)於柱高,為分離(lí)不同組(zǔ)分,凝膠柱床(chuáng)要(yào)有(yǒu)適(shì)宜的(dí)高度,分離(lí)度與柱高(gāo)的(dí)平(píng)方(fāng)根(gēn)相關(guān),但(dàn)由(yóu)於軟(ruǎn)凝(níng)膠柱過高(gāo)擠(jǐ)壓(yā)變形(xíng)阻塞(sāi),一般不超(chāo)過(guò)1米。
層析柱(zhù)是凝膠層(céng)析技(jì)術(shù)中(zhōng)的主體(tǐ),一(yī)般用玻璃管或(huò)有(yǒu)機玻(bō)璃(lí)管。層析柱的(dí)直徑大小不影響(xiǎng)分(fēn)離度,樣品(pǐn)用(yòng)量大,可(kě)加大柱的(dí)直(zhí)徑(jìng),一(yī)般(bān)製備用(yòng)凝膠(jiāo)柱,直(zhí)徑大(dà)於2厘米,但(dàn)在加樣時(shí)應將樣品(pǐn)均匀分布於凝(níng)膠(jiāo)柱(zhù)床(chuáng)麵上。此(cǐ)外(wài),直徑(jìng)加大,洗脫液體體積增(zēng)加(jiā),樣品稀釋(shì)度大。
將一(yī)定量薄(báo)層層(céng)析矽膠(jiāo)裝入搪瓷盤置於(yú)烘(hōng)箱中(zhōng),於(yú)105。C活(huó)化2H後(hòu),取(qǔ)出(chū)放置室(shì)溫(wēn)即(jí)可(kě)裝柱。柱(zhù)子(zǐ)采用幹法填(tián)充(chōng),填(tián)滿(mǎn)整個柱體(tǐ),不留死體積(jī),密(mì)封後(hòu)用柱塞(sāi)式計量溶劑泵按丙酮一(yī)石油醚(5:95)比例(lì)泵(bèng)入溶劑,至溶劑流(liú)出(chū)止(zhǐ)。
有效(xiào)成分(fēn)經TLC檢(jiǎn)識全部流(liú)出後,用純丙酮5000ML再(zài)生(shēng),丙酮一(yī)石(shí)油醚(5:95)平衡後(hòu),可再(zài)次上(shàng)樣,反復使用(使用(yòng)次數隨原料不同(tóng)而異,一般(bān)可(kě)連續使(shǐ)用(yòng)2—6個(gè)月以上(shàng))。